工业上主要有两条路线：一是从甜叶菊干叶中经水提、树脂分离、重结晶得到高纯糖苷（INS 960a）；二是在提取物基础上用酶法转化、酶法糖基化或微生物发酵改构，得到甜度与口感不同的产品（INS 960b–960d）。
| 工序 | 提取流程 |
|---|
| 路线 A｜甜菊叶提取 · INS 960a |
| 1 浸提 | 热水或水-乙醇溶出糖苷糖苷易溶于水和含水乙醇，难溶于纯有机溶剂 —— 这是水提路线的化学基础 |
| 2 除杂 | 絮凝 · 离心 · 膜过滤去掉蛋白、多糖和色素 |
| 3 树脂分离 | 大孔吸附树脂，水-乙醇梯度洗脱各组分极性不同，在树脂上的吸附与解吸顺序也不同 |
| 4 脱盐脱色 | 离子交换树脂 + 活性炭活性炭吸附残余色素，离子交换树脂去除无机盐 |
| 5 成型 | 浓缩结晶 或 喷雾干燥纯度 95% 以上需重结晶，RA97 一类高规格往往多次结晶 |
| 路线 B｜生物转化与发酵 · INS 960b–960d |
| 酶法转化 960c | 糖基转移酶改变糖基连接位置，转成 Reb M、Reb D 等高甜度组分以天然甜菊糖苷为底物；产物甜度更高、后味更干净 |
| 酶法糖基化 960d | 在糖苷上再接一个或多个葡萄糖基 —— 这就是 GSG环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）催化，淀粉或糊精作糖基供体。多接的糖基提高水溶性、让甜味曲线更圆润，甜度倍数稍有下降。低温双酶工艺酶相同，区别只在反应温度与加酶次序，按欧盟口径即 E 960d |
| 微生物发酵 960b | 工程菌以葡萄糖为碳源直接产出经甜菊醇合成与糖基化酶系，不依赖叶片原料 |
表 1｜两条路线的工序对照。路线 A 从甜叶菊干叶经五步得到高纯糖苷（INS 960a）；路线 B 是近十年新增的生物转化与发酵路线，在提取物基础上改构，产物按工艺分列 960b–960d。
相关产品 Reb M · Reb D · RA97 · GSG
以上各种路线的产品，成分表上可能都叫"甜菊糖苷"，但在国际规格里已是不同编号的食品添加剂，检测方法、标签表述、出口文件都不一样。
→ 延伸：甜菊糖苷的规格（RA97、RA60、ST95）分别代表什么？